摘要：在《Journal of Endocrinology》雜志刊發(fā)的一篇報告中，研究人員使用GDS-80低壓基因槍將質粒轉染入心肌細胞，遵循制造商的方案。將2微克質粒DNA懸浮于5微升PBS中，并在15 psi的氦氣壓力下輸送至培養(yǎng)的心肌細胞。該方法的轉染效率為25%。經6小時AngII刺激后，用雙熒光素酶報告系統(tǒng)制備細胞提取物，并用光度計測定雙熒光素酶活性。結果表明，AngII可增強培養(yǎng)的大鼠心肌細胞中肌肉抑制素的表達。AngII誘導的肌肉生長抑制素通過p38-MAP激酶和MEF-2途徑介導。

　　血管緊張素Ⅱ(AngII)在心肌重塑中起重要作用，促進心肌細胞肥大。肌生長抑制素是肌肉生長的負調節(jié)因子，在肥厚和梗死的心臟中增加。由于肌生長抑制素在限制骨骼肌生長中起作用，肥厚心臟中肌生長抑制素的上調可能代表心肌細胞中肌生長抑制素抑制心肌細胞過度生長的負反饋機制。

　　在《Journal of Endocrinology》雜志刊發(fā)的一篇報告中，實驗人員發(fā)現(xiàn)機械拉伸是通過 p38 MAP 激酶和 MEF-2 途徑誘導肌生長抑制素表達。AngII對心肌細胞myostatin表達的直接影響尚未被研究。AngII誘導培養(yǎng)乳鼠心肌細胞myostatin蛋白表達呈劑量依賴性。AngII以時間依賴的方式顯著增加myostatin蛋白和mRNA的表達。在AngII刺激前30分鐘加入氯沙坦、SB203580或p38 siRNA可顯著阻斷AngII對肌生長抑制素蛋白的增加。AngII顯著增加p38的磷酸化，而SB205380和氯沙坦則減弱AngII誘導的p38的磷酸化。AngII增加，而myostatin Mut質粒、SB203580、氯沙坦和心肌細胞增強因子2(MEF-2)抗體可抑制myostatin啟動子活性。myostatin和AngII共刺激顯著抑制AngII誘導的蛋白質合成。

　　研究人員構建了一個-1977至+32bp的小鼠肌生長抑制素啟動子。肌生長抑制素蛋白啟動子包含MEF-2保守位點(ctaataa)，位于-637到-646bp之間。對于突變體，使用突變試劑盒對MEF-2結合位點進行突變。DNA測序證實了位點特異性突變。使用GDS-80低壓基因槍將質粒轉染入心肌細胞，遵循制造商的方案。將2微克質粒DNA懸浮于5微升PBS中，并在15 psi的氦氣壓力下輸送至培養(yǎng)的心肌細胞。該方法的轉染效率為25%。經6小時AngII刺激后，用雙熒光素酶報告系統(tǒng)制備細胞提取物，并用光度計測定雙熒光素酶活性。

　　在這項研究中，研究人員證明了 AngII 上調了心肌細胞中肌生長抑制素的表達，并且 p38 MAP 激酶和 MEF-2 轉錄因子參與了肌生長抑制素誘導的信號通路。心肌細胞通過肥大生長對增加的機械負荷和激素刺激作出反應，但機械應力或激素因素也是觸發(fā)心肌細胞退化和死亡的初始步驟的重要刺激，這在適應不良的心肌重塑和心力衰竭中起關鍵作用。

　　在沒有 AngII 刺激的情況下，外源性添加肌肉生長抑制素對心臟肥大沒有影響。這些結果表明 AngII 對肥大和肌生長抑制素表達的作用是違反直覺的。盡管 p38 MAP 激酶是幾乎所有真核細胞類型中生長和應激刺激的重要傳感器，但 p38 MAP 激酶信號在心臟肥大中的作用仍存在爭議。

　　SB203580是p38 MAP激酶的強效特異性抑制劑，完全抑制AngII誘導的肌生長抑制素表達，而PI-3激酶抑制劑不具有抑制作用，JNK和p42/p44 MAP激酶抑制劑具有部分抑制作用。這些數(shù)據暗示 p38 MAP 激酶途徑，而不是 JNK、p42/p44 MAP 和 PI-3 激酶途徑是介導 MEF-2 轉錄活性增加的重要信號通路。

　　總結起來，AngII可增強培養(yǎng)的大鼠心肌細胞中myostatin的表達。AngII誘導的肌肉生長抑制素通過p38-MAP激酶和MEF-2途徑介導。

　　[1] Angiotensin II activates myostatin expression in cultured rat neonatal cardiomyocytes via p38 MAP kinase and myocyte enhance factor 2 pathway[J]. Journal of Endocrinology, 2008, 197(1):85-93.